①37℃显色5 min后应在20 min内完成吸光值测定，若样本数量过多建议分批进行测定；
②若A测定大于 0.5，建议将待测样本使用蒸馏水适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
③若A测定小于 0.01或约等于A空白，建议适当增加样本量后再进行测定，计算时相应修改；
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酸性条件下，Cu2+从铜蓝蛋白和清蛋白中解离出来，与络合剂3,5-二溴-PAESA反应，生成紫色络合物，产物在580 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可定量检测组织铜的含量。