糖化血红蛋白上的糖在酸性条件下加热，脱水缩合生成 5-羟甲基糠醛（5-HMF），5-HMF 与 TBA（Thiobarbituric Acid, TBA）反应生成有色物质，产物在443 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可定量检测糖化血红蛋白的含量。①加入试剂三时需边加边混匀，加入部分试剂三后可能出现反应液凝固的现象，需搅匀后再进行离心；
②若总血红蛋白测定吸光值 ΔA 总大于 1.0时，建议将待测样本使用蒸馏水适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；若总血红蛋白测定吸光值 ΔA 总小于 0.02时，建议增加待测样本制备过程中的样本量，重新提取后再进行测定，计算时相应修改；
③若糖化血红蛋白测定吸光值 ΔA 测定大于 1.0时，建议将待测样本使用蒸馏水适当稀释后进行测定，计算时相应修改；若糖化血红蛋白测定吸光值 ΔA 测定小于 0.02时，建议增加待测样本制备过程中的样本量，重新提取后再进行测定，计算时相应修改；
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